Cas9核酸酶慢病毒颗粒，简便而强大的慢性病毒载体

英文名字 Cas9 核酸酶纯化 Lentifect 慢病毒颗粒

中文名称 Cas9 核酸酶纯化 Lentifect 慢病毒颗粒

供应商 GeneCopoeia

产品货号 LPP-CP-LvC9NU-01-100

产品报价 ￥4500/100uL

背景资料&产品描述：

Cas9核酸酶克隆表达按照人类密码子优化过的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表达一个Cas9 D10A 切口酶基因。该切口酶是一个Cas9突变体，第10位氨基酸从野生型的天冬氨酸突变成了丙氨酸。

CRISPR-Cas9体系是由sgRNA和Cas9核酸酶构成的DNA靶向识别剪切复合体。sgRNA识别一段20bp、3端紧接着5'-N-G-G-3' PAM位点的DNA靶序列，Cas9核酸酶在该靶序列上生成DNA双链断裂（DSB）。DNA双链断裂（DSB）会被细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）机制修复。NHEJ机制容易在修复的断裂位点引入插入/缺失突变，造成阅读框移码而产生基因敲除的效果。同源重组（HR）需要细胞内同时存在一段带有靶点同源序列的供体DNA作为修复模板，我们可以通过对供体DNA进行设计，在众多实验体系中实现基因敲除或者敲入突变修饰、报告基因等等一系列基因组修饰。

Cas9 D10A切口酶跟野生型的Cas9一样，也使用sgRNA识别靶序列。但Cas9 D10A切口酶在靶序列上生成的是单链切口而非双链断裂。单链切口通常会由NHEJ和HR以外的机制地修复。但通过设计一对定向正确的sgRNA分别识别靶点两侧的DNA双链，我们可以诱导Cas9 D10A分别在靶点两侧的DNA双链上各生成一个单链切口，构成一个双链断裂（DSB），进而诱导NHEJ或HR修复机制。这种双切口策略常被用在要求低脱靶率的实验设计中。

CRISPR-Cas9体系的RNA-DNA识别机制为基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。该体系其中一个最重要的优势是Cas9蛋白可在多个不同的gRNA的引导下同时靶向多个基因组位点。

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