荧光免疫印迹（Western Blot）实验服务原理 及步骤

超详细的荧光免疫印迹（Western Blot）实验服务

一，实验原理

WB（Western blot），即免疫印迹（immunoblotting），是一项在分子生物学、生物化学、免疫学等领域中应用非常广泛的技术。这一技术利用抗体与组织或细胞样品中特定蛋白的特异性结合作用，根据条带的位置和强弱实现蛋白鉴定和表达分析。常用的WB显色方法是ECL化学发光法。

而随着荧光检测的普及，许多科研人员将western blot的检测方法从化学发光转到多重荧光。这是因为荧光检测能够实现多重western blot分析，并生成可定量的精准数据满足期刊杂志对于数据发表的要求。荧光检测解决了化学发光检测所面临的一些局限性，例如：数据的重现性，半定量，动态范围等问题。所以荧光Western blot变得越来越流行。对于需要更复杂的信号线性分析和蛋白丰度相关性的研究人员来说，荧光方法是一个很好的选择。

二、荧光WB的优势：

可以同时检测多个目的蛋白：

可以区分分子量相近的蛋白：

可准确定量：

低背景，高信噪比：

线性范围更广，适合检测低丰度蛋白：

三、荧光WB技术操作步骤

蛋白样本制备及含量检测；

SDS-PAGE凝胶电泳；

转膜及抗体结合反应；

LI-COR Odyssey红外激光扫描成像系扫描

四、客户提供及送样要求

需检测的样品；

一抗（可自行提供，或在本公司购买相应指标）；

内参抗体由安赛思提供。

送样要求：

离体后迅速超低温处理并-80 ℃冻存的组织样品，干冰运输；

组织：动物组织应不少于100 mg，植物组织不少于500 mg；

细胞：大于5×106个细胞；

煮沸变性后的蛋白样本，冰袋运输。

五、最终交付

WB检测结果图片和完整实验报告

七、案例展示

红色：GAPDH-Dylight 680;

绿色：AKT Dylight 800

八、服务流程：

http://www.annsci.com/2020/09/08/western-blot/